Молекулярно-генетическое исследование, которое позволяет определить и дифференцировать 21 генотип вируса папилломы человека в исследуемом материале, что дает возможность охарактеризовать онкогенный потенциал инфекции и спланировать тактику лечения.
Вирус папилломы человека (ВПЧ) с определением генотипа.
Human Papillomavirus (HPV), DNA, Genotyping.
Полимеразная цепная реакция в режиме реального времени.
Какой биоматериал можно использовать для исследования?
Соскоб из прямой кишки, соскоб урогенитальный.
Общая информация об исследовании
Вирус папилломы человека – ДНКсодержащий вирус из семейства паповавирусов, ассоциированный с развитием остроконечных кондилом, бородавок, предраковых изменений аногенитальной области, рака шейки матки. Существует более 100 типов ВГЧ, около 30 из них могут инфицировать половые пути, и около 14 генотипов связаны с развитием рака шейки матки, прямой кишки, полового члена и новообразований других локализаций (например, орофарингеальной плоскоклеточной карциномы).
Онкогенные папиллома-вирусы имеют в составе ДНК белки Е6/Е7, которые способны супрессировать процессы апоптоза (запрограммированной гибели) в клетках с измененным генетическим материалом. Генотипы 1, 2, 3, 5 считаются неонкогенными, а генотипы 6, 11, 42, 43, 44 относятся к папиллома-вирусам низкого онкогенного риска. ВПЧ высокого онкогенного риска – это генотипы 16, 18, 31, 33, 35, 39, 45, 51, 52, 56, 58, 59, 66, 68, 73 и 82.
Основной путь распространения вируса – половой. Возможна вертикальная (от матери к ребенку) и контактно-бытовая передача инфекции. В организм человека может попасть несколько типов ВПЧ одновременно. Заражаются обычно после начала половой жизни в возрасте 16-25 лет. При инфицировании онкогенными генотипами вируса между 25 и 35 годами вероятны интраэпителиальные поражения и через несколько лет развитие рака. В 70 % случаев в течение первого года и в 90 % случаев через 2 года после инфицирования возможно самоизлечение.
Инфицирование различными путями, а также разными типами вируса обуславливает особенности течения заболевания, локализацию эпителиальных изменений и риск развития неопластических процессов в местах поражения кожи и слизистых. Подошвенные бородавки вызываются генотипами 1, 2, 4, 63, а обычные бородавки – 2-м и 7-м типом ВПЧ. Папиллома-вирус 6-го, 7-го, 11-го, 16-го и 32-го типов может стать причиной папиллом ротовой полости и гортани, а ВПЧ 6-го, 11-го, 42-го, 44-го типов – аногенитальных бородавок. Папилломы, вызванные даже неонкогенными или низкоонкогенными папиллома-вирусами, рекомендовано удалять. Следует также отметить, что риск возникновения новообразований выше у людей с иммуннодефицитами.
Инфицирование онкогенными вирусами не означает, что у пациента будет раковое заболевание, однако требует дальнейшего тщательного регулярного наблюдения за инфицированным. При выявлении изменений кожи и слизистой с образованием кондилом, бородавок или внутриэпителиальной дисплазии рекомендовано исключение папиллома-вирусной инфекции и определение генотипа вируса, что позволяет оценить риск развития рака и определить тактику лечения.
Полимеразная цепная реакция (ПЦР) выявляет ДНК вируса папилломы человека (ВПЧ) с высокой специфичностью и чувствительностью. Определение ДНК различных генотипов вируса должно обязательно проводиться с учетом результатов цитологического и гистологического исследований биоптата, удаленной папилломы, бородавки, мазка из шейки матки или участка с дисплазией, метаплазией или признаками малигнизации.
Для чего используется исследование?
Когда назначается исследование?
Что означают результаты?
Референсные значения: отрицательно.
* Контроль взятия материала (КВМ) – требуется для анализа качества взятия исследуемого материала. В относительном типе анализа используется для нормализации количества ДНК вируса в образце.
Процедура взятия мазка на флору известна каждой женщине, посетившей смотровой кабинет. Так как анализ позволяет определить микробиологический состав, выявить гормональные нарушения и воспалительные процессы, мазок берётся независимо от того, имеет ли женщина жалобы на здоровье или нет.
СТОИМОСТЬ МАЗКА НА ФЛОРУ В НАШЕЙ КЛИНИКЕ В САНКТ-ПЕТЕРБУРГЕ
С половых губ мазок берётся редко, если только для этого имеются особые показания, например, наличие воспалённых участков. В этом случае мазок заменяют соскобом. Чаще гинекологу нужен влагалищный мазок. Он берётся шпателем из заднего свода влагалища, при воспалении — с видимого участка.
Полученный материал наносится на стекло, подсушивается, сверху наносится несколько капель этанола. Образец маркируется и отправляется в закрытой ёмкости в лабораторию.
При выявлении ИППП (ЗППП) мазок берётся с помощью тампона, который помещается в стерильную пробирку и передаётся на исследование.
Во многих медицинских учреждениях практикуется приём пациенток с одноразовыми диагностическими наборами. Например, часто используется набор «Юнона», предназначенный специально для взятия проб различного характера (венерологические, гинекологические). Все предметы асептично упакованы, и имеют разный состав в зависимости от характера осмотра.
В клинике Диана все одноразовые расходные материалы уже включены в стоимость приема или анализов, поэтому с собой ничего нести не нужно.
Как берут мазок из уретры
Забор мазка из уретры проводится двумя способами:
Как берут мазок из шейки матки
Существует 4 вида мазков из шейки матки:
Мазок на флору из шейки матки выявляет не только болезнетворные бактерии, но и патогенные эпителиальные клетки.
Процедура проводится с помощью зеркала Куско. Это зеркало не в привычном понимании этого слова. Оно больше похоже на прозрачные щипцы, которые раздвигают стенки влагалища, освобождая доступ к шейке матки. Затем шпателем или цитощёткой делается соскоб, по которому оценивается состояние эпителиальных клеток.
Расшифровка результатов анализов гинекологического мазка. Норма
Показатель
Из влагалища
Их уретры
Из шейки матки
Лактобактерии
Палочки Дедерлейна
Нет
Нет
Количество палочковой флоры
от + до ++++
от + до ++++
от + до ++++
Кандида
до 104 КОЕ/мл
отсутствует
отсутствует
Плоский эпителий
5-10
5-10
5-10
Лейкоциты
0-10
0-5
0-30
Эритроциты
0-2
0-2
0-2
Слизь
умеренное количество
отсутствует
умеренное количество
Гонококки Gn
отсутствует
отсутствует
отсутствует
Трихомонада Trich
отсутствует
отсутствует
отсутствует
Ключевые клетки
отсутствуют
отсутствуют
отсутствуют
Что означают отклонения в мазке из влагалища
Отклонения от нормы в мазке из влагалища говорят о следующем:
Низкое содержание палочек Дедерлейна указывает на плохой микробиоценоз с преобладанием болезнетворной микрофлоры. Палочки Дедерлейна — это вытянутые по форме лактобактерии, которые в качестве продукта жизнедеятельности образуют молочную кислоту. Благодаря им поддерживается кислая среда во влагалище, защищающая от проникновения патогенных микроорганизмов. Молочная кислота активизирует иммунные клетки, ведущие борьбу с микробами.
При снижении числа палочек Дедерлейна у женщины развивается влагалищный дисбактериоз. Это случается во время болезни, гормональной терапии, приёме антибиотиков и гормонов, сильном или затяжном стрессе, заражении ЗППП.
При обнаружении малого количества лактобактерий женщине дополнительно назначают ПАП-тест на скрытые инфекции. Если он не даст положительного ответа, то пациентки прописывают вагинальные свечи, которые подавляют патогенную микрофлору, помогая палочкам Дедерлейна.
Высокое содержание кокковой флоры и снижение палочковый флоры указывает на ослабление иммунитета или активизацию условно-патогенной микрофлоры. Степень чистоты влагалища определяется от нормоциноза до вагинита.
Нормальный мазок соответствует 1 и 2-й степеням чистоты. В этом случае «население» слизистой поверхности влагалища должно соответствовать параметрам:
При 3 степени чистоты у женщины диагностируется бактериальный вагиноз — нарушение естественного баланса при снижении количества лактобактерий и увеличении содержания грамотрицательных палочек.
Также при 3 и 4 степени чистоты влагалища характерен вагинит (кольпит) — увеличение количества условно-патогенной микрофлоры, сопровождающееся воспалением поверхности влагалища.
Какие патогены и отклонения обнаруживаются в плохих мазках
Нормальные показатели мазков из уретры
При взятии мазка из уретры норма мазка является таковой:
Чтобы узнать возбудителя инфекции, у пациентки берётся бактериальный посев — лабораторный анализ, позволяющий найти грамотный антибиотик, к которому имеется хорошая чувствительность.
Нормы мазка из цервикального канала
Мазок из цервикального канала и соскоб с шейки матки имеют разное значение.
Соскоб относится к области цитологии — выявление патологического размножения клеток, способных перерождаться или уже переродившихся в рак. Процедуру проводят девушкам старше 18 лет.
Мазок проводится из самого цервикального канала. Для этого с помощью зеркала раздвигаются стенки влагалища, и из канала берётся биоматериал. Процедура довольно неприятная, но очень информативна.
Результаты мазка должны быть такими:
Что делать, если результаты мазка плохие?
Результаты анализов выдаются на руки или приходят лечащему гинекологу. При наличии отклонений от норм, доктор назначает лечение или дополнительную диагностику.
После прохождения курса лечения, нужно ещё раз сдать анализы, чтобы убедиться, что болезнь полностью ушла. Недолеченные заболевания заканчиваются осложнениями и хроническими формами. Хронические заболевания можно только гасить, а вот полностью избавиться от них нельзя.
Дисбаланс микробиоты урогенитального тракта женщин, обусловленный условно-патогенными микроорганизмами, характеризуется изменением качественного и/или количественного состава нормобиоты, метаболическими и иммунными нарушениями, в ряде случаев клиническими проявлениями. Частным проявлением выраженного дисбаланса биоты является бактериальный вагиноз.
Полное выявление этиологической структуры заболевания позволит своевременно установить диагноз, выявить осложненные формы течения заболевания и, соответственно, провести направленную адекватную терапию, в том числе на ранней стадии, до развития осложнений.
В основу метода положена комплексная количественная оценка биоты методом ПЦР в «реальном времени» (РВ). Проводят сравнение количества конкретных представителей нормо – и условно-патогенной биоты с общим количеством микроорганизмов с целью выявления дисбаланса биоты, степени его выраженности и определения этиологической роли конкретных микроорганизмов в его развитии при условии контроля качества получения клинического образца для исследования.
Способ позволяет в короткие сроки объективно оценить:
Показатели, анализируемые с помощью набора Фемофлор 16:
Контроль взятия материала (КВМ).
Необходимым условием количественного анализа урогенитальной биоты является правильная техника взятия соскоба с поверхности соответствующего биотопа (уретра, цервикальный канал, влагалище). Показателем правильного взятия биоматериала является достаточное количество геномной ДНК человека в пробе. Источником этой ДНК являются эпителиальные клетки, попадающие в пробу при правильной технике взятия биоматериала. Оптимальная величина этого показателя должна составлять не менее 105.
Показатель оценивается в абсолютных значениях.
Общая бактериальная масса (ОБМ).
Показатель, по которому можно судить об общем количестве бактерий. Оценивается в абсолютных значениях. Обычно эта величина составляет 106 – 108. Величина ОБМ большая, чем 108, свидетельствует об избыточном микробном обсеменении биоматериала. Чем больше величина ОБМ, тем больше величина микробной массы в образце. Величина показателя ОБМ меньшая, чем 105 соответствует сниженному количеству микроорганизмов в образце, что может быть следствием атрофических процессов или антибиотикотерапии.
Оценка нормобиоты.
Главным представителем нормофлоры урогенитального тракта у женщин репродуктивного возраста являются представители рода Lactobacillus (ЛБ).
Оценка нормобиоты производится как в абсолютных значениях, так и относительно общей бактериальной массы. В норме абсолютное количество лактобацилл практически не отличается от общего количества бактерий, то есть составляет 106–108
Относительное количество лактобацилл – разница между Lg10 общей бактериальной массы (ОБМ) и Lg10 лактобацилл (ЛБ). Например, если общее количество бактерий составляет 107, Lg10 этого количества будет равен 7. В норме разница логарифмов (порядков) ОБМ и ЛБ не должна превышать 0,5, что определяется погрешностью метода.
Умеренно сниженный уровень лактобацилл – при разнице логарифмов (порядков) от 0,5 до 1.
Значительно сниженный уровень лактобацилл–при разнице логарифмов (порядков) больше чем 1.
Чем меньшую долю в ОБМ составляют лактобациллы, тем сильнее угнетена нормальная флора.
Оценка аэробной и анаэробной условно-патогенной микрофлоры.
Количественный уровень аэробной и анаэробной условно-патогенной микрофлоры можно оценить как в абсолютных, так и относительных значениях. Абсолютные количества соответствуют показателям при бактериологичесих исследованиях. Например, количество микроорганизма Gardnerella vaginalis составляет 103.
Относительное количество того или иного микроорганизма вычисляется по отношению к количеству Lactobacillus spp., по разнице между Lg10 лактобацилл и Lg10 конкретного микроорганизма аналогично тому, как вычисляется относительное количество самих лактобацилл по отношению к общему количеству бактерий (ОБМ).
В урогенитальном тракте женщин репродуктивного возраста как аэробные, так и анаэробные условно-патогенные микроорганизмы могут быть причиной патологических процессов в урогенитальном тракте.
Оценка микоплазм, уреаплазм и грибов рода Candida.
Показания к назначению анализа
Материал для исследования
Для исследования используют соскобы эпителиальных клеток
Критерии количественной оценки биоты
Абсолютный показатель является ориентировочным, зависит от техники взятия биоматериала и способа выделения ДНК.
Нормоценоз
Состояние нормоценоза характеризуется следующими показателями:
Умеренный дисбиоз
Выраженный дисбиоз.
Состояние выраженного дисбиоза характеризуется следующими показателями:
Аэробный, если дисбаланс, вызван аэробной микрофлорой: Enterobacteraceae, Streptococcus spp и Staphylococcus spp
Смешанный если дисбаланс, вызван любым сочетанием аэробной, анаэробной флоры и грибами рода Candida.
Инфекционный процесс, вызванный грибами рода Candida, может протекать без дисбиотических нарушений со стороны условно-патогенной флоры, а также может сочетаться с дисбиозом.
Фемофлор 16 – расширенное молекулярно-биологическое исследование качественного и количественного состава микрофлоры мочеполовых путей у женщин, включающее оценку общей бактериальной массы, состояния нормофлоры, определение широкого спектра клинически значимых условно-патогенных микроорганизмов, в том числе микоплазм и уреаплазм, а также грибов рода Candida.
Исследование информативно только для женщин репродуктивного возраста.
Исследование биоценоза влагалища методом ПЦР.
Femoflor 16 Real Time PCR.
Полимеразная цепная реакция в режиме реального времени.
Какой биоматериал можно использовать для исследования?
Как правильно подготовиться к исследованию?
Общая информация об исследовании
По данным проекта Human Microbiom Project Национального института здоровья США, установлено, что в организме человека обитает около 10 000 видов микроорганизмов, преимущественными локусами распространения которых являются кожа, кишечник и урогенитальный тракт. Микрофлора мочеполовых путей у женщин в норме представлена преимущественно различными видами бактерий рода Lactobacillus, которые играют большую роль в предотвращении колонизации урогенитального тракта болезнетворными микроорганизмами. Вследствие различных причин может возникать дисбаланс микробиоты мочеполового тракта, выражающийся в нарушении её количественных и качественных характеристик, что в итоге приводит к развитию воспалительного процесса. Рядом исследований показано, что в этиологической структуре мочеполовых инфекций, обусловленных дисбалансом условно-патогенной флоры, в большинстве случаев играет роль ассоциация микроорганизмов и изменения в составе нормофлоры. Клинически такие состояния очень часто характеризуются нечеткой выраженностью симптомов, отсутствием специфических признаков и склонностью к хроническому течению, что обуславливает высокий риск присоединения инфекций, вызванных патогенными микроорганизмами, а также развития осложнений со стороны репродуктивной системы. Это определяет первостепенную роль своевременной и качественной диагностики урогенитальных инфекций, ассоциированных с условно-патогенной микрофлорой. Традиционные лабораторные исследования, проводимые для обнаружения болезнетворных микроорганизмов, которые позволяют определить факт наличия возбудителя, малоинформативны в диагностике заболеваний, вызванных условно-патогенной флорой, так как обнаружение её представителей само по себе не свидетельствует о заболевании. Также необходимо отметить, что условно-патогенная микрофлора, наиболее часто являющаяся причиной воспалительных заболеваний мочеполовых путей у женщин, представлена преимущественно анаэробными микроорганизмами (живущими в условиях отсутствия кислорода). Культивирование таких бактерий является технически очень сложным процессом, требующим специального оборудования, и в настоящее время в большинстве лечебных учреждений затруднено.
Проблему качественной диагностики урогенитальных инфекций, вызванных условно-патогенной флорой, позволило решить внедрение в практику метода полимеразной цепной реакции с детекцией результатов в режиме реального времени. Методика исследования основана на обнаружении в исследуемом материале генетического материала (ДНК) микроорганизма, его многочисленном копировании и идентификации. Так как количество полученных в конце реакции копий зависит от исходного количества исследуемой ДНК, анализ позволяет определить содержание микроорганизма в биоматериале. Отечественная разработка Фемофлор, основанная на технологии RT-ПЦР, предназначена для исследования биоценоза урогенитального тракта у женщин и позволяет выявлять ДНК условно-патогенных микроорганизмов, ДНК лактобактерий и геномной ДНК человека (в качестве контрольного параметра). Спектр выявляемых показателей позволяет получить комплексное представление о качественных и количественных изменениях состава микрофлоры урогенитального тракта, что во многом определяет адекватную тактику медикаментозной терапии. Разработано несколько вариантов комплектации тестовых систем Фемофлор, в зависимости от спектра выявляемых условно-патогенных микроорганизмов. Фемофлор 16 позволяет определять 25 показателей, включая контроль взятия материала, общую бактериальную массу и 23 группы микроорганизмов:
Lactobacillusspp. – в большинстве случаев составляют основу нормальной микрофлоры влагалища у женщин репродуктивного возраста;
СемействоEnterobacteriaceae,Streptococcusspp.,Staphylococcusspp. – являются компонентами нормальной флоры урогенитального тракта у женщин, могут быть причиной вагинита;
Gardnerellavaginalis,Prevotellabivia,Porphyromonasspp. – представители нормальной и транзиторной (Gardnerella vaginalis) флоры, этиологические агенты развития бактериального вагиноза;
Eubacteriumspp. – бактерии этого семейства преимущественно обитают в кишечнике, условно патогенны, могут вызывать развитие бактериального вагиноза;
Sneathiaspp.,Leptotrihiaspp.,Fusobacteriumspp. – анаэробные микроорганизмы, с ними может быть ассоциировано развитие бактериального вагиноза;
Veilonellaspp.,Megasphaeraspp.,Dialisterspp. – условно-патогенные анаэробные бактерии, участвуют в развитии бактериального вагиноза;
Lachnobacteriumspp. – анаэробные труднокультивируемые бактерии, ассоциированы с развитием бактериального вагиноза;
Clostridiumspp. – представитель нормальной флоры кишечника, в урогенитальном тракте условно-патогенный микроорганизм, может вызывать бактериальный вагиноз;
Mobiluncusspp.,Corynebacteriumspp. – анаэробные условно-патогенные микроорганизмы, могут вызывать инфекции урогенитального тракта;
Mycoplasmagenitalium – патогенный микроорганизм, вызывает уретрит (воспаление мочеиспускательного канала).
Для чего используется исследование?
Когда назначается исследование?
При наличии клинических или лабораторных признаков воспалительного процесса урогенитального тракта.
При планирующихся оперативных вмешательствах на органах малого таза с высоким риском развития инфекционных осложнений.
Диагностический поиск при наличии отягощенного акушерского анамнеза (невынашивание беременности, перинатальные потери, бесплодие).
Плановое обследование перед планированием беременности, при подготовке к процедуре экстракорпорального оплодотворения.
Мониторинг эффективности проводимой терапии, восстановления нормоценоза.
Что означают результаты?
КВМ – контроль взятия материала. Необходимым условием качественного ПЦР-исследования считается правильное взятие биоматериала. Показателем адекватности полученного образца является достаточное количество ДНК человека, которая в процессе реакции выделяется из клеток, выстилающих слизистую оболочку и попадающих в пробу при правильном взятии мазка. Показатель КВМ менее 10 4 свидетельствует о недостоверных результатах ПЦР, в таких случаях рекомендуется повторное взятие биоматериала.
ОБМ (общая бактериальная масса) – общее количество бактерий, имеющихся в исследуемом образце. Снижение ОБМ ниже пороговых значений свидетельствует о недостаточном заселении данного локуса бактериями, в том числе вследствие антибиотикотерапии или гормональных нарушений.
Оценка условно-патогенной флоры. Количество аэробных и анаэробных бактерий также оценивается в абсолютных и относительных показателях. Относительный показатель высчитывается по разнице между десятичными логарифмами микроорганизма или их группы и ОБМ. По уровню относительной величины определяется незначительное, умеренное и значительное повышение.
Оценка микоплазм, уреаплазм и грибов родаCandida проводится только по абсолютному показателю, при превышении определенного порога (10 3 для Candida, 10 4 для микоуреаплазм) аппарат фиксирует положительный результат.
Для более удобной интерпретации результатов исследования используется специальная цветовая маркировка:
контрольные показатели: белый – соответствие критериям, красный – несоответствие;
условно-патогенные микроорганизмы и дрожжеподобные грибы: белый – соответствие критериям нормы, желтый – умеренное отклонение, красный – выраженное отклонение от нормы;
патогенные микроорганизмы: белый – не обнаружены, красный – обнаружены.
По результатам исследования автоматически дается характеристика состояния микрофлоры: нормоценоз, умеренный или выраженный дисбаланс, который по этиологической структуре может быть анаэробным, аэробным и смешанным.
Микроскопическое исследование отделяемого мочеполовых органов женщин (микрофлора), 3 локализации
Исследование микробиоценоза влагалища с определением чувствительности к антибиотикам